Microscopy techniques and the study of synapses　顕微鏡技術とシナプスの研究

1.はじめに
正常なシナプス接続、数、有効性は、適切な脳機能にとって重要です。の
シナプスまたは樹状突起の定量化のための顕微鏡技術または戦略の開発
スパイン (シナプスの大部分を受け取る) は、通常の脳機能の研究にとって重要です。
発達、成人期、脳の病気。この章では、方法と方法について説明します。
さまざまな種で使用できるシナプス接続の研究のための戦略。その方法は
次のページに示されますが、十分に灌流された動物の脳サンプルだけでなく、
よく保存された死後の人間の脳組織にも正常に適用できます。特定のケースでは
死後のヒトサンプルの重要な要素は、保存前の死後の間隔です。
特に、超微細構造研究のパフォーマンスのための組織の品質に影響を与える可能性があります。かかわらず
シナプスの研究は、その固有の複雑さと可塑性のために困難な場合があります。
のダイナミクスと機能のさまざまな側面を研究するための複数の戦略が必要です。
これらの構造。シナプスの発達やシナプスの病理学を研究するとき、いくつかの質問が必要です
常に取り組むべきこと: シナプスで発現するタンパク質はどれか? 変更はありますか？
これらのタンパク質の発現？シナプス結合、形態、または数に変化はありますか? たくさんの
これらの質問のうち、以下に示すように、顕微鏡技術の組み合わせを使用して答えることができます
次の段落。
提案された方法論の有用性を説明するために、一連の例に基づいて選択しました。
私たちの研究室で行われた研究について。での研究に基づいて、意図的に例を選択しました。
ここで説明する方法の汎用性を実証するさまざまな種。
* 責任著者: 電子メール: epcostas@uab.edu. 電話: +1 205 9967574
+ 両方の著者が原稿に均等に貢献しました。
+ 両方の著者が原稿に均等に貢献しました。
©FORMATEX 2007 顕微鏡における最新の研究および教育トピック。
A. Méndez-Vilas および J. Diaz (Eds.)
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2. シナプスの研究のための蛍光および明視野顕微鏡の使用
2.1 シナプスタンパク質の発現の研究: 免疫蛍光技術。
このセクションでは、検出のための蛍光技術の使用の実際の例を紹介します。
シナプス分子。提示されたケースは、シナプトフィジン (a
シナプス前タンパク質) 発生中 (図 1A-C) および成体 (図 1D-F) 哺乳類
脳。どちらの場合も、二重免疫蛍光法を使用してシナプトフィジンの発現を研究しました
線条体のさまざまな区画。哺乳類の線条体には、解剖学的に異なる 2 つの線条体があります。
コンパートメント: いくつかの点で互いに異なるパッチとマトリックス
神経化学組成、神経組織、発達スケジュール、および接続性 [1-8]。
組織保存: 生理食塩水に続いて 4% の冷溶液を使用してラットを灌流しました。
リン酸緩衝液中のパラホルムアルデヒド 0.1 M (PB)。同じ方法で調製したツパイの脳は、
Thomas Norton 博士 (UAB) のご厚意により提供。次に、脳を同じ固定液で後固定しました
最低24時間。その後、組織を PB 中の 30% スクロースの溶液で凍結保護し、
ドライアイスで冷凍。フリーフローティング 30 μ m 冠状断面は、クライオスタットを使用して取得し、処理
標準的な免疫蛍光技術を使用しています。
免疫蛍光と光学密度の値は、以前にシナプスの研究に使用されていました
タンパク質[9、10]。適切な画像解析ソフトウェアを使用して、対象領域の平均強度値
が得られ、次の式を使用して光学濃度値に変換されます。
OPTICAL DENSITY= – ログ [(強度 – 背景 / 最大反射 – 背景]
-強度: 蛍光サンプルでは、画像解析ソフトウェアを使用して得られた強度値は、
サンプル中に存在する蛍光団による特定の波長の発光の測定。
-バックグラウンド: 蛍光サンプルでは、バックグラウンドは、蛍光サンプルによって生成される残留蛍光です。
組織または準備の他の成分の自己蛍光。
-最大反射または最大反射光は、によって得られる強度値です。
特定の波長で最大の反射光を放出できる蛍光体を測定します。で
実際の場合、最大反射光は、同じものを含む標準化されたスライドで測定されます
サンプルよりも高い蛍光体を生成し、（可能な限り）均一な蛍光を生成することができます
強度値。
光学密度の分析は、シナプスタンパク質発現の変化を研究するための便利なツールです
開発中または病的状態による。この方法論の精度は非常に高く、
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